穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選

簡要描述：穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選：穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白，或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細(xì)胞株。

更新時間：2022-12-22
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穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進行篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白，或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細(xì)胞株。常用物理方法（電轉(zhuǎn)）、化學(xué)方法（脂質(zhì)體等）、生物方法（病毒）。

穩(wěn)定細(xì)胞株的篩選 實驗原理

外源基因在細(xì)胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩(wěn)定表達（又叫表達）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長期表達目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細(xì)胞進行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin）。

實驗流程：

1、載體構(gòu)建（表達質(zhì)粒載體、病毒載體）；

2、轉(zhuǎn)染/感染；

3、目的蛋白初步檢測；

4、抗生素篩選；

5、目的蛋白再次檢測（定性/半定量）；

6、單克隆細(xì)胞株穩(wěn)定性檢測。

客戶提供：培養(yǎng)好的細(xì)胞

公司提供：基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達細(xì)胞株

實驗周期：大約3-4月左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞實驗內(nèi)容而定。

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