腫瘤細胞侵襲

簡要描述：腫瘤細胞侵襲實驗原理:將Transwell小室放入培養(yǎng)板中小室內稱上室培養(yǎng)板內稱下室上下層培養(yǎng)液以膜相隔并在膜上室鋪基質膠用來模擬體內細胞外基質。如果上室的細胞要轉移到下室需先分泌基質金屬蛋白酶（ MMPs ）將基質膠降解才能通過膜后通過計數(shù)下室的細胞量即可反映細胞的侵襲能力。

更新時間：2022-12-23
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Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分，含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結構，這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel 的濾膜，這與體內情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。細胞穿膜所用的時間與Martrigel的用量有關，選擇 25ugMartrigell鋪膜，16小時后觀察結果較為合適。穿過濾膜的細胞多數(shù)粘附在濾膜下表面，可用棉簽將上表面的細胞拭去，然后用乙醇固定濾膜，PE染色，在光鏡下觀察統(tǒng)計穿過Martrigel的細胞數(shù)。另外用Transwell小室也可進行重建基質膜侵襲分析，這一方法是在 Transwell小室吊籃式上腔的濾膜上鋪上30ugMartrigel，加入細胞72h后觀察結果。值得注意的是，細胞在Transwell腔中培養(yǎng) 72小時后，有相當數(shù)量穿過濾膜的細胞不再粘附在濾膜下表面，而是脫落進人下腔溶液中．因此統(tǒng)計穿過基質膜的細胞數(shù)目時應把這部分細胞考慮在內。腫瘤細胞穿過重建基質膜的能力與它的體內侵襲轉移能力表現(xiàn)出較好的相關性，可以用重建基質膜模型初篩抗侵襲藥物。

腫瘤細胞侵襲實驗（Tumour InvasionAssay）可以：（1）研究各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉移的影響；（2）一些抑制血管生成的新藥研究；（3）研究腫瘤細胞侵襲和轉移機制。

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