細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)步驟

原代培養(yǎng)是指直接從組織或器官中分離出細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的方法，它能夠保持細(xì)胞的原始特性。

以下是根據(jù)最新信息進(jìn)行細(xì)胞實(shí)驗(yàn)之成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)的步驟：

  1. 動物處死和組織采集：

    1.1 使用C57小鼠，年齡在8-10周之間。通過頸椎脫位處死后，使用75%乙醇進(jìn)行消毒，并在無菌條件下操作。

    1.2 從小鼠體內(nèi)分離大腿腿骨，去除筋膜、肌肉和結(jié)締組織，以獲取關(guān)節(jié)軟骨組織。

  2. 軟骨組織的處理：

    2.1 將軟骨組織 制成小于1mm3的小塊，并使用含有2%雙抗的PBS進(jìn)行清洗。

    2.2 使用剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片，并加入預(yù)熱的Collagenase D進(jìn)行消化。

  3. 消化和細(xì)胞分離：

    3.1 將含有軟骨碎片的管放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行消化，第一次消化時間為2小時。

    3.2 消化結(jié)束后，使用含血清的培養(yǎng)基終止消化，并通過40μm細(xì)胞篩過濾，離心收集細(xì)胞。

    3.3 對未消化的組織進(jìn)行第二次消化，同樣使用預(yù)熱的Collagenase D，消化時間也為2小時，然后收集細(xì)胞。

   4. 細(xì)胞培養(yǎng)：

    4.1 將收集的細(xì)胞用DMEMwanquan培養(yǎng)基重懸，計(jì)數(shù)后種植在24孔板中。

    4.2 培養(yǎng)24小時后更換新鮮的wanquan培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

       在進(jìn)行原代培養(yǎng)時，需要特別注意無菌操作，以避免細(xì)胞污染。此外，培養(yǎng)條件（如溫度、CO2濃度和培養(yǎng)基的成分）對細(xì)胞的生長和存活至關(guān)重要。在實(shí)驗(yàn)

過程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的安全規(guī)程和操作指南。